1. 研究目的与意义
[内容] 本课题组经过前期筛选,发现新化合物N-EXT具有较强的抗过敏活性,我们以N-EXT为研究对象,观察其对小鼠过敏性皮炎的治疗效果,并用体外实验对其作用机制进行初步探究。
在这篇研究中,我们用0.5%异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)作致敏剂诱导雄性Balb/c小鼠建立Th2型变应性接触性皮炎(allergic contact dermatitis,ACD)模型,并进一步观察N-EXT干预对小鼠耳肿胀、耳组织病理学以及脾脏指数的影响。
实验选用IL-4、IL-5和IL-13作为指标,运用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测小鼠耳匀浆中的Th2型炎症因子水平。
2. 文献综述
变应性接触性皮炎免疫反应机制及研究进展摘要:变应性接触性皮炎(Allergic Contact Dermatitis, ACD)是临床上最常见的接触性皮炎,可由多种环境或内在因素诱发,其发病率日益升高。
科研工作者发现树突状细胞、T细胞、NK细胞和巨噬细胞在ACD免疫反应中均发挥重要作用,同时,B 细胞、肥大细胞和干细胞在ACD反应中表现出的活性使得相关研究更加复杂。
本文从对近年来ACD免疫反应细胞通路及分子机制进行综述,以期为后续研究提供参考。
3. 设计方案和技术路线
1. Th2型=小鼠ACD模型建立及给药方案BALB/c 小鼠适应性饲养2天后在腹部部位涂1.5% FITC溶液造模,d6小鼠左、右耳各涂20 μL 0.6% FITC溶液,24 h之后测量小鼠左、右耳厚度计算耳肿胀,Th2型小鼠ACD模型建立及给药方案见下图。
2. 分组与给药将小鼠按体重随机分为空白对照组、模型组、地塞米松组(DEX组,剂量为0.67 mgkg -1)、低剂量组(2.5 mgkg-1)、中剂量组(10 mgkg-1)和高剂量组(40 mgkg-1)。
3. 耳组织病理学检查将浸泡于10%福尔马林溶液中固定的耳组织进行石蜡包埋,常规切片后进行HE染色,于镜下观察耳组织病理变化,并在同一倍率视野进行拍照。
4. 工作计划
序号 进度安排任务 2022年 1月 2月 3月 4月 5月 6月1 前期准备(包括文献调研;购买试剂; N-EXT筛选等);设计实验进度。
2 FITC诱导的小鼠变应性接触性皮炎体内模型,对模型进行评价。
3 观察N-EXT干预对小鼠耳肿胀、耳组织病理学以及脾脏指数的影响。
5. 难点与创新点
本课题组在前期工作基础上,认为N-EXT能够改善过敏症状、恢复皮肤功能。
本研究利用FITC诱导的小鼠Th2型变应性接触性皮炎为模型,创新性地以N-EXT为对象,分别考察不同浓度N-EXT对脾脏淋巴细胞、RAW264.7巨噬细胞和人永生化角质形成细胞增殖活动的影响,研究N-EXT对过敏性皮炎的作用,阐释其作用机制。
相关研究国内外尚未见深入报道,具有创新性。
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