1. 研究目的与意义
病毒性肝炎、酒精性及非酒精性脂肪肝等是全球范围内常见高发的慢性肝病，其中相当大的一部分将发展为肝纤维化、肝硬化甚至肝癌，是导致死亡的主要原因之一。
肝纤维化是各种慢性肝病的共同病理过程，目前尚无有效的抗肝纤维化治疗方法。
如何有效防治肝纤维化仍是困扰当今医学界的重大难题。
2. 文献综述
脂滴自噬在肝纤维化中的作用及研究进展夏雅雯1,2，郑仕中1,2,3（1.南京中医药大学，药学院，江苏 南京 210023；2.南京中医药大学中药学一级学科，江苏 南京210023; 3.江苏省中药药效与安全性评价重点实验室，江苏 南京 210023）摘 要：肝纤维化是继发于各种慢性肝损伤之后的一种多细胞损伤修复过程，肝纤维化的发生是多因素的，目前研究认为涉及众多细胞因子； 而肝纤维化的发展过程中肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）的活化是该病理生理变化的中心环节，肝星状细胞的活化会使得肝细胞外基质（extracellular matrix，ECM）的合成增多而降解不足，最终导致ECM的过度沉积[1]，从而促进肝纤维化的发生发展。
近年来研究表明，在肝纤维化过程中HSC中的脂滴数量发生明显变化，通过控制脂滴自噬调节HSC的活化增殖已成为当今防治肝纤维化的一个新的靶标。
本文阐述了脂滴自噬对肝纤维化的作用及其研究进展。
3. 设计方案和技术路线
【研究方案】 第一部分：明确双氢青蒿素对HSC细胞内脂滴含量的影响体外培养HSC，设置对照组，以及DHA给药组，动态检测 HSC 活化标志蛋白与信号分子 α-SMA、TGF-βRI、TGF-βRII、PDGF-βR，脂滴数量的变化以及脂滴相关指标，包括脂滴形态、数目、脂质基因 SREBP-1c、FAS、CPT1等的表达。
明确双氢青蒿素对HSC 细胞内脂滴含量的影响。
第二部分：明确双氢青蒿素对HSC细胞自噬影响体外培养HSC细胞，设置对照组，以及DHA不同浓度给药组，动态检测下述指标：自噬相关指标，包括电镜观察自噬体形态及自噬囊泡数目、 LC3 荧光强度、自噬关键亚单位 Atg1/ULK、 Atg6/Beclin1、LC3、Atg9/VMP1 的表达，体外明确双氢青蒿素对HSC自噬水平影响。
4. 工作计划
2022.2-2022.3 体外培养HSC，设置对照组，以及DHA给药组，动态检测 HSC 活化标志蛋白与信号分子 α-SMA、TGF-βRI、TGF-βRII、PDGF-βR，脂滴数量的变化以及脂滴相关指标，包括脂滴形态、数目、脂质基因 SREBP-1c、FAS、CPT1等的表达。
明确双氢青蒿素对HSC 细胞内脂滴含量的影响。
2022.3-2022.4 体外培养HSC细胞，设置对照组，以及DHA不同浓度给药组，动态检测下述指标：自噬相关指标，包括电镜观察自噬体形态及自噬囊泡数目、 LC3 荧光强度、自噬关键亚单位 Atg1/ULK、 Atg6/Beclin1、LC3、Atg9/VMP1 的表达，体外明确双氢青蒿素对HSC自噬水平影响。
5. 难点与创新点
(1)本项目的提出是在申请者实验室前期对细胞自噬调控HSC活化的大量研究基础上提出的，鲜明特色在于拥有坚实的研究基础，并紧扣当前国内外研究前沿，前瞻性地提出调控肝星状细胞脂滴周转从而达到抗肝纤维化的科学假说，具有高起点和新颖性。
(2)从细胞和分子水平，应用RT-PCR、Western blot、免疫沉淀、免疫荧光、转染等分子生物学技术阐明细胞自噬调控HSC脂滴周转的分子机制，为通过细胞自噬防治肝纤维化提供理论依据。
(3)本项目立足于肝纤维化领域近几年的最新研究成果，从细胞自噬与HSC脂滴周转两个崭新的角度，创新研究细胞自噬调控HSC脂滴周转的分子作用机制，紧扣了当前肝纤维化药物研究领域的前沿思路, 其结果对今后的临床应用提供了有效的数据参考，对肝纤维化的防治具有促进作用。
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