1. 研究目的与意义
本课题的研究内容是利用蛋白质的多重反应监测技术(MRM)多对缺氧诱导因子(HIFs)进行定量。
MRM是一种能够在复杂样品中对特定分子质量进行定量检测的质谱分析技术,被分析物在一级扫描下即在第一个四级杆质量分析器中根据荷质比选择特定的母离子,进入第二个四级杆碰撞室发生碰撞后解离,再在二级扫描中即第三个质量分析器中分析预先选定的,特异性的碎片离子(子离子),然后到达离子检测器,传输的离子的信号强度被转化为色谱峰高用于分析。
MRM分析是针对有机分子的结构特异性,且通过母离子与子离子的双重质量筛选,可显著降低质谱信号的噪声干扰,从而获取较灵敏和高重现性的靶标分子的定性和定量信息。
2. 文献综述
多重反应监测技术靶向定量蛋白质的研究进展摘要:多重反应监测技术(MRM)是一种串联技术,采用三重四级杆质谱仪进行质谱分析。
它是靶向定量应用的黄金标准,是一种能够在复杂样品中对特定分子质量进行定量检测的质谱分析技术,特别是一些细胞内痕量存在的不稳定蛋白质或者蛋白质翻译后修饰产物,质谱的检测限也要明显低于常规的免疫印迹法。
目前MRM技术常用于药物代谢产物、激素和农药杀虫剂等有机小分子以及蛋白质、核酸、糖类等生物大分子领域的研究。
3. 设计方案和技术路线
本研究的主要内容是对LC-QQQ-MS方法进行摸索,首先用RP-HPLC摸索合适的流动相比例,再进入质谱寻找Q1合适的MRM母离子,Q3寻找合适的MRM母子离子对,优化质谱条件,使信号最强,确定MRM定量方法,最后用确定的MRM方法对已知浓度HIF酶解合成多肽进行定量,评价方法的精密度、准确度、灵敏度等参数。
4. 工作计划
2022年1月-3月12日:查阅文献,撰写开题报告3月20日 :基本完成对RP-HPLC合适流动相比例的摸索3月底-4月10日 :完成对MRM方法的确定4月底-5月初:完成已知浓度HIF酶解合成多肽进行定量5月:进行数据分析并撰写论文6月:修改论文并提交
5. 难点与创新点
我们利用MRM技术对缺氧诱导因子即HIFs蛋白进行定量,传统的Western Blot、ELISA等技术方法对其定量不准确,而且对于羟化的HIF蛋白,免疫印迹法很难进行定量。
用MRM技术对蛋白质进行定量比免疫印迹法更直接更准确。
特别是一些细胞内痕量存在的不稳定蛋白质或者蛋白质翻译后修饰产物,质谱的检测限也要明显低于常规的免疫印迹法。
以上是毕业论文开题报告,课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。