1. 研究目的与意义
双孢蘑菇（Agaricus bisporus）作为一种大型可食用真菌，是目前世界上人工栽培最广泛、产量最高、消费量最普遍一种食用菌，来源广泛、价格低廉，并且随着栽培技术的不断发展，已经实现了工厂化生产。麦角甾醇（Ergosterol），又称麦角固醇，主要存在于酵母和真菌中小分子次生代谢产物，是真菌细胞质膜的重要组分。目前研究表明，在香菇、金针菇等诸多食用菌中，双孢蘑菇的麦角甾醇含量最高（5-8mg/g DW）。麦角甾醇被认为是重要的维生素D原，同时也是双孢蘑菇中典型的活性物质，具有缓解糖尿病、降低胆固醇等多种功能。因此，促进双孢蘑菇中麦角甾醇的合成积累具有重要的科学和经济意义。
研究表明，麦角甾醇的合成在食用菌子实体生长过程中呈动态变化，在成熟时含量普遍较低，仅有不超过10mg/g DW。而目前关于如何调控食用菌中麦角甾醇含量增加的研究非常少，通过国内外文献检索仅发现利用水杨酸和茉莉酸甲酯（MeJA）处理诱导猴头菇菌丝中麦角甾醇增加的研究，关于如何提高双孢蘑菇中麦角甾醇含量的未见报道。
茉莉酸甲酯作为一种信号分子，能够选择性诱导特定基因的表达，引起植物代谢过程的一系列变化，从而调节植物细胞次生代谢产物的积累。戴肖东和李迎雪等研究证明MeJA能够促进液体发酵培养猴头菇菌丝体的生长，提高麦角甾醇的含量，并阐明了MeJA诱导麦角甾醇合成过程涉及的具体的15类基因表达。这为我们开展双孢蘑菇中麦角甾醇合成的研究提供了新视角。
2. 研究内容和预期目标
（1）研究内容： 本实验利用不同浓度的MeJA溶液以20mL/m2均匀喷施双孢蘑菇，并设置空白组（蒸馏水）、对照组（2%乙醇）。自MeJA喷施处理后每天采样，72h后采收双孢蘑菇，样品贮藏在恒温恒湿箱（4℃，90%湿度）中10天。采用HPLC法测定双孢蘑菇中麦角甾醇、VD在贮藏期间的含量变化，并测定麦角甾醇合成相关酶的酶活性变化，结合麦角甾醇合成途径的中间产物的含量变化，探究MeJA对双孢蘑菇中麦角甾醇含量变化的影响。
（2）拟解决的关键问题：MeJA的处理方式，诱导的最佳浓度及时间的确定，麦角甾醇、VD2含量测定方法的优化等。
（3）写作提纲
3. 国内外研究现状
关于麦角甾醇的代谢积累研究，目前主要是利用基因工程手段获得麦角甾醇高产微生物菌株，并通过控制工艺参数促进麦角甾醇的生物合成，而关于如何调控食用菌中麦角甾醇的积累的研究上非常少。通过检索找到以下一些研究进展：
国内2012年汪茜等在《南方农业学报》发表题为#8220;不同培养条件对双孢蘑菇菌丝生长的影响#8221;的文章，探讨了不同培养条件对双孢蘑菇菌株菌丝生长的影响，研究7个双孢蘑菇菌株的形态特征及不同温度、pH、光照、碳氮源对其菌丝生长的影响，为此次菌丝培育提供参考。2017年童梦楠等人发表《经紫外光处理的双孢蘑菇中维生素D2和麦角甾醇的含量--以HPLC及液G质联用法分析》 ，给麦角甾醇的含量测定提供依据。2014年曹龙辉等在《中国酿造》发表《麦角甾醇研究进展》，总结了近十年来国内外对麦角甾醇的研究状况，分别对麦角甾醇的生物合成途径、高产麦角甾醇菌株的选育和麦角甾醇的萃取方法予以综述，为进一步研究麦角甾醇提供参考。2012年，东北林业大学的李迎雪发表论文《MeJA对猴头5L0433菌株麦角甾醇合成的影响及消减文库的ESTs分析》 。2014年，戴肖东发表《猴头菌麦角甾醇高产菌株筛选及代谢调控的研究》 。
国外1992年Debieu D，Gall G. Phytochemistry 发表《Ergosterol biosynthesis and its inhibition by fenpropimorph in Fusariumspecies》 ，探讨了麦角甾醇合成及其抑制作用。2005年Jasinghe V J ,Perera C O.发表《Distribution of ergosterol in the different tissues of mushrooms and its effect on the conversion of vintamin D2 by UV irradiation》 ，对于麦角甾醇在蘑菇不同组织中的分布及其对紫外线照射下维生素D转化的影响进行了讨论。2009年Koyyalamudi S R发表 《formation an bioavailability from Agaricus bisporus button mushrooms treated with ultraviolet irradiation》 ，研究紫外辐照处理的双孢蘑菇中维生素D2的形成和生物利用。国内外各学者对茉莉酸及其甲酯、麦角甾醇及其合成途径中间产物、VD2转化等做出的研究为本实验研究奠定了基础、提供了强有力的支撑。
4. 计划与进度安排
（1）2022．11-2022．12 拟定课题研究计划，开展文献资料搜集、查阅工作，了解目前国内外在此研究方面的动态。
（2）2022．12-2022．01 对整体研究课题进行初期规划，进行系统性总结；完成课题的开题报告工作。
（3）2022．01-2022．04 进行MeJA对双孢蘑菇麦角甾醇合成的影响实验；整数据，完成实验报告。
5. 参考文献
[1] 李迎雪. MeJA对猴头5L0433菌株麦角甾醇合成的影响及消减文库的ESTs分析[D]. 东北林业大学, 2011.
[2] 汪茜, 吴圣进, 韦仕岩,等. 不同培养条件对双孢蘑菇菌丝生长的影响[J]. 南方农业学报, 2012, 43(2):217-222.
[3] 何秀萍, 张博润, 郭雪娜,等. 甾醇C-24(28)还原酶基因高表达对酵母菌麦角甾醇生物合成的影响[C] 首届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文摘要集. 2002.
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